Oczyszczanie białka jest procesem oddzielania frakcji białkowych określonego celu od mieszanin tkanek, komórek lub białek. Oczyszczanie białka powinno nie tylko promować silną czystość izolowanego białka, ale także utrzymywać aktywność biologiczną białka. Dlatego konieczne jest zaprojektowanie jednego lub więcej kombinacji schematów oczyszczania zgodnie z różnymi właściwościami białka. Główną strategią oczyszczania białek jest wykorzystanie podobieństw i różnic między różnymi białkami. Na podstawie podobieństwa między białkami można usunąć materiał nieposiadający białka, a następnie docelowe białko można oddzielić na podstawie różnic białka. Zwłaszcza w przypadku szybkiego rozwoju technologii inżynierii genetycznej, chociaż wiele białek wyraża się przez rekombinację genetyczną, poziom oczyszczania białka jest bezpośrednio związany z czystością i aktywnością białka. Dlatego oczyszczanie białka pozostaje ważnym tematem we współczesnej biotechnologii.
Cel
Z jednej strony izolacja i oczyszczanie białek są szczególnie ważne dla dogłębnego badania struktury i funkcji białek, a z drugiej strony separacja i oczyszczanie białek są również bezpośrednio związane z efektem zastosowania białek. Dlatego oczyszczanie białek odgrywa ważną rolę w badaniach i zastosowaniu nauk biologicznych, a technologia separacji i oczyszczania białka jest również kluczową technologią w branży biologicznej.
Droga
Zasada oczyszczania białka jest oddzielenie docelowego białka z rozsądną wydajnością, szybkością, wydajnością i czystością przy jednoczesnym zachowaniu jego aktywności biologicznej i integralności chemicznej. Główne kroki obejmują wybór materiałów eksperymentalnych, wstępne obróbkę, ekstrakcję białka, klasyfikację surowej białka, klasyfikację drobnych białek i identyfikacja białka.
Proces oczyszczania musi zwrócić uwagę na: 1, aby zminimalizować wpływ na aktywność białka, na przykład zapobieganie zbyt wysokim lub zbyt niskim pH, wysokim temperaturze i efektami metali ciężkich; 2. Działaj w niskiej temperaturze; 3. Staraj się zachować wiodący poziom zawartości białka w próbce.
Klasyfikacja
Oczyszczanie białka można sklasyfikować według rodzaju metody oczyszczania:
I. Metoda opadów, w tym osadzanie soli, stosując jony soli do zniszczenia zestalonej warstwy na powierzchni białka, odsłaniając obszar hydrofobowy, a następnie osadzanie się w celu osiągnięcia celu wstępnego oczyszczania; Organiczne osadzanie, wykorzystując rozpuszczalniki organiczne w celu zmniejszenia aktywności wody, niszczy krzepnięte film na powierzchni białka, prowadząc do wytrącania białka. Opady jest łagodną metodą oczyszczania, ale czystość nie jest wysoka i może być stosowana jako główny proces oczyszczania.
Druga metoda dializy, w tym torba dializacyjna i metoda ultrafiltracji. Dzięki dializie i ultrafiltracji można wyeliminować małe zanieczyszczenia cząsteczkowe, a roztwór białkowy można również zastąpić.
3. Metody chromatograficzne obejmują chromatografię żelu sita molekularnego, chromatografię wymiany jonów, chromatografię powinowactwa (chromatografia powinowactwa chelatowania metalu, chromatografia A/G, białko receptora, substrat itp.), Chromatografia hydrofobowa, chromatografia odwrotna i wysokowydajna chromatografia ciekła. Aby osiągnąć lepsze wyniki, często wymagana jest kombinacja dwóch metod chromatograficznych, takich jak chromatografia chromatografii i chromatografii wymiany jonów.
Oprócz powyższych metod istnieje wiele innych metod oczyszczania, takich jak wirowanie gradientu gęstości, które są odpowiednie do wytwarzania białek o dużej czystości, ale wymagają wyższych warunków eksperymentalnych. Kryształy białkowe są odpowiednie do analizy struktury biologicznej, takich jak transmisja X.
Czas postu: 2025-07-01