Po chemicznej syntezie peptydów przez fMOC w fazie stałej, istnieje wiele metod rozszczepienia, a obecnie powszechnie stosujemy dwa podstawowe typy.
1. Metoda silnego kwasu (TFA)
Suchową żywicę umieszczono w kolbie wstrząsowej i dodano odpowiednią ilość padlinożerców zawierających. (Padające) Odczynnik cięcia kwasu trifluorooctowego (TFA), żywica 10-25 ml/g, ograniczona i wstrząśnięta w temperaturze pokojowej wraz z obrotem. Żywicę osuszono, przemyto 2-3 razy nowym TFA, przesącz połączono i 8-10 razy upuścił objętość eteru lodowego dietylu. Czasami niektóre TFA można na parze, aby uzyskać surowe osady peptydu. Eter może być stosowany do zwiększenia wydajności opadów poprzez chłodzenie wspomagane lodem. Wreszcie zebrano wytrącony surowy produkt peptydowy.
Odpowiednia żywica: żywica Wang lub żywica amidowa lodowiska
2, Metoda słabej kwasu (TFA lub rozcieńczenie kwasu octowego) 1% TFA:
1 g peptydów zawierających żywicę dodano do szklanej kolby wstrząsowej roztworu dichlorometanu zawierającego 1%TFA, zamkniętą i wstrząsniętą przez 2 min. Przesącz wciśnięto azotem do innej nowej kolby koktajli metanolu zawierającej 10% pirydyny, a procedurę powtórzono 10 razy. Ochronne peptydy pozostające na żywicy przemyto trzykrotnie przy użyciu 30 ml DCM i 30 ml MeOH. Pozostałości sprawdzono i oczyszczono za pomocą TLC lub HPLC. Wszystkie filtraty połączono, a 5% rozpuszczalnika ugotowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Dodano czterdzieści ml wody, a opady wspierano w mieszaninie chłodzącej. Po filtracji produkt przemyto trzykrotnie czystą wodą, umieszczono w piecu suszącym próżniowo i wysuszono KOH lub P2O5.
Rozcieńczony kwas octowy:
Peptydy zawieszone na żywicy traktowano roztworem cięcia przez 2 godziny przy użyciu ACOH // TFE/DCM (2: 2: 6), żywicy przefiltrowano, a żywicę przemyto trzy razy roztworem cięcia. Nadmiar kwasu octowego usunięto przez dodanie 15-krotnego n-heksanu do mieszanego filtratu i stromej obrotowej.
Żywica aplikacyjna: żywica 2-CTC
Czas postu: 2025-07-01