Rekombinowane antygeny białkowe często mają kilka różnych epitopów, z których niektóre są epitopami sekwencji, a niektóre są epitopami strukturalnymi. Przeciwciała poliklonalne uzyskane przez immunizację zwierząt denaturowanymi antygenami są mieszaninami przeciwciał specyficznych dla poszczególnych epitopów i mogą być ogólnie stosowane do wykrywania naturalnych struktur lub denaturowanych białek docelowych. Bez boczną korzyścią stosowania denaturowanych białek jako immunogenów jest to, że denaturowane białka są bardziej immunogenne i mogą stymulować silną odpowiedź immunologiczną u zwierząt.
System ekspresji Escherichia coli jest zwykle wybierany do celów antygenowych, ponieważ jest to najbardziej kosztowny system pod względem czasu i pieniędzy. W celu poprawy możliwości ekspresji białka docelowego i wygody oczyszczania, czasami wyrażany jest tylko niewielki fragment białka docelowego, takiego jak specyficzna domena.
Trójwymiarowa struktura białek
Specyficzna domena białka
Jeśli celem przygotowania przeciwciał jest wyłącznie do wykrywania WB, ekonomiczne i szybkie stosowanie syntetycznego małego peptydu jako antygenu, ale istnieje ryzyko słabej immunogenności lub nieregenności z powodu niewłaściwego wyboru segmentu peptydowego. Ponieważ przygotowanie przeciwciał wymaga długiego okresu, często wybierane są dwa lub trzy różne segmenty peptydowe do przygotowania przeciwciał za pomocą antygenu polipeptydowego w celu zapewnienia wskaźnika powodzenia eksperymentu.
Czystość antygenu polipeptydowego do immunizacji jest wymagana, aby była większa niż 80%. Chociaż wyższa czystość może teoretycznie uzyskać przeciwciała o lepszej swoistości, w praktyce zwierzęta zawsze wytwarzają dużą liczbę niespecyficznych przeciwciał, masując w ten sposób korzyści płynące z czystości antygenu.
Ponadto przygotowanie przeciwciał z małych peptydów musi być usieciowane do odpowiedniego antygenu nośnika, aby zwiększyć jego immunogenność. Dwoma popularnymi nośnikami antygenowymi to KLH i BSA.
Czas postu: 2025-07-03