Jako instrument o bardzo precyzyjnym, HPLC może z łatwością prowadzić do kłopotliwych małych problemów, jeśli nie jest on działany we właściwy sposób podczas użytkowania. Jednym z najczęstszych problemów jest problem kompresji kolumny. Jak szybko rozwiązać wadliwy chromatograf. System HPLC składa się głównie z butelki zbiornika, pompy, wtryskiwacza, kolumny, komory temperaturowej kolumny, detektora i systemu przetwarzania danych. W przypadku całego systemu filary, pompy i detektory są kluczowymi elementami i głównymi lokalizacjami, które są podatne na problemy.
Kluczem ciśnienia do kolumny jest obszar, który wymaga szczególnej uwagi podczas korzystania z HPLC. Stabilność ciśnienia kolumny jest ściśle związana z chromatograficznym kształtem piku, wydajnością kolumny, wydajnością separacji i czasem retencji. Stabilność ciśnienia w kolumnie nie oznacza, że wartość ciśnienia jest stabilna o wartości stabilnej, ale raczej, że zakres fluktuacji ciśnienia wynosi od 345 kPa lub 50 psi (umożliwiając zastosowanie elucji gradientu, gdy ciśnienie kolumny jest stabilne i powoli zmieniające się). Zbyt wysokie lub zbyt niskie ciśnienie to problem ciśnienia w kolumnie.
Najbardziej podatne na awarie i rozwiązania HPLC
1, wysokie ciśnienie jest najczęstszym problemem w stosowaniu HPLC. Oznacza to nagły wzrost presji. Zasadniczo istnieją następujące powody: (1) ogólnie wynika to z blokady kanału przepływowego. W tym momencie powinniśmy go zbadać. A. Najpierw odetnij wlot pompy próżniowej. W tym momencie rurka podgląda była wypełniona płynem, tak aby rurka zerka była mniejsza niż butelka rozpuszczalnika, aby sprawdzić, czy płyn kapałał na woli. Jeśli płyn nie kapie ani ocieka powoli, głowica filtra rozpuszczalnika jest zablokowana. Leczenie: Namocz 30% kwasu azotowego przez pół godziny i spłucz wodą ultraczystą. Jeśli ciecz losowo kapie, głowica filtra rozpuszczalnika jest normalna i jest sprawdzana; B. Otwórz zawór czyszczenia, aby faza ruchoma nie przechodziła przez kolumnę, a jeśli ciśnienie nie jest znacznie zmniejszone, biała głowica filtra jest zablokowana. Obróbka: Filtrowane biało -głośne usunięto i sonikowano 10% izopropanolem przez pół godziny. Zakładając, że ciśnienie spadnie poniżej 100Psi, filtrowana biała głowa jest normalna i jest sprawdzana; C. Zdejmij końcówkę kolumny, jeśli ciśnienie nie zmniejsza się, kolumna jest zablokowana. Leczenie: jeśli jest to blokada soli bufora, spłucz 95%, aż ciśnienie będzie normalne. Jeśli niedrożność jest spowodowana przez jakiś bardzo zachowany materiał, należy użyć silniejszego przepływu niż obecna faza ruchomowa, aby rzucić się w kierunku normalnego ciśnienia. Jeśli długoterminowe ciśnienie czyszczące nie zmniejsza się zgodnie z powyższą metodą, wlot i wylot kolumny można uznać za podłączone do instrumentu wręcz przeciwnie, a kolumnę można wyczyścić za pomocą fazy ruchomej. W tym czasie, jeśli ciśnienie w kolumnie nadal nie jest zmniejszone, płyta sitowa wjazdowa kolumna może zostać wymieniona tylko, ale gdy operacja nie jest dobra, łatwo jest doprowadzić do zmniejszenia efektu kolumny, więc spróbuj użyć mniej. W przypadku trudnych problemów można rozważyć wymianę kolumn.
(2) Niepoprawne ustawienie natężenia przepływu: Można zresetować prawidłowe natężenie przepływu.
(3) Niepoprawny współczynnik przepływu: Wskaźnik lepkości różnych proporcji przepływów jest inny, a odpowiadające ciśnienie układu przepływu o wyższej lepkości jest również większe. Jeśli to możliwe, niższe rozpuszczalniki lepkości można wymienić lub ponownie ustawić i przygotować.
(4) Ciśnienie układu zero dryfu: dostosuj zero czujnika poziomu cieczy.
2, ciśnienie jest zbyt niskie (1) jest zwykle spowodowane wyciekiem systemu. Co zrobić: Znajdź każde połączenie, zwłaszcza interfejs na obu końcach kolumny, i dokręć obszar wycieku. Usuń słupek i dokręć lub ustawiaj folię PTFE z odpowiednią siłą.
(2) Gaz wchodzi do pompy, ale ciśnienie jest zwykle niestabilne w tym czasie, wysokie i niskie. Poważnie, pompa nie będzie w stanie wchłonąć płynu. Metoda obróbki: Otwórz zawór czyszczący i wyczyść się przy prędkości przepływu 3 ~ 5 ml/min. Jeśli nie, pęcherzyki powietrza aspirowano na zaworze wydechowym za pomocą dedykowanej rurki igły.
(3) Brak odpływu fazy mobilnej: Sprawdź, czy w butelce zbiornikowej występuje faza mobilna, czy zanurzenie jest zanurzone w fazie mobilnej i czy pompa działa.
(4) Zawór odniesienia nie jest zamknięty: Zawór odniesienia jest zamknięty po zwalnianiu. Zwykle spada do 0,1. ~ 0,2 ml/ min po zamknięciu zaworu odniesienia.
Streszczenie:
W tym artykule analizowane są tylko częste problemy w chromatografii cieczowej. Oczywiście w naszym praktycznym zastosowaniu napotkamy więcej innych problemów. W obsłudze błędów powinniśmy przestrzegać następujących zasad: zmienić tylko jeden czynnik na raz, aby określić związek między czynnikiem hipotetycznym a problemem; Zasadniczo, zastępując części w celu rozwiązywania problemów, powinniśmy zwrócić uwagę na odłożenie nienaruszonych części z powrotem na miejsce, aby zapobiec odpadom; Tworzenie dobrego rekordu jest kluczem do sukcesu obsługi błędów. Podsumowując, przy użyciu HPLC ważne jest, aby zwrócić uwagę na próbkę wstępnej obróbki oraz właściwe działanie i konserwację sprzętu.
Czas postu: 2025-07-02