Najbardziej podatne na awarie i rozwiązania HPLC

Jako instrument o wysokiej precyzji, HPLC może łatwo prowadzić do pewnych kłopotliwych drobnych problemów, jeśli nie będzie obsługiwana prawidłowo podczas użytkowania.Jednym z najczęstszych problemów jest problem kompresji kolumny.Jak szybko rozwiązać problem z wadliwym chromatografem.System HPLC składa się głównie z butelki zbiorczej, pompy, wtryskiwacza, kolumny, komory temperaturowej kolumny, detektora i systemu przetwarzania danych.Dla całego systemu filary, pompy i detektory są kluczowymi elementami i głównymi lokalizacjami, które są podatne na problemy.

Kluczem do ciśnienia w kolumnie jest obszar, na który należy zwrócić szczególną uwagę podczas stosowania HPLC.Stabilność ciśnienia kolumny jest ściśle powiązana z kształtem piku chromatograficznego, wydajnością kolumny, wydajnością separacji i czasem retencji.Stabilność ciśnienia w kolumnie nie oznacza, że ​​wartość ciśnienia jest stabilna na stałym poziomie, ale raczej, że zakres wahań ciśnienia mieści się w przedziale od 345 kPa do 50 PSI (co pozwala na stosowanie elucji gradientowej, gdy ciśnienie w kolumnie jest stabilne i powoli się zmienia).Zbyt wysokie lub zbyt niskie ciśnienie jest problemem związanym z ciśnieniem w kolumnie.

Najbardziej podatne na awarie i rozwiązania HPLC

1, najczęstszym problemem podczas stosowania HPLC jest wysokie ciśnienie.Oznacza to nagły wzrost ciśnienia.Ogólnie rzecz biorąc, istnieją następujące przyczyny: (1) Zwykle jest to spowodowane zablokowaniem kanału przepływowego.W tym miejscu powinniśmy zbadać to fragmentarycznie.A.Najpierw odetnij wlot pompy próżniowej.W tym momencie rurkę PEEK napełniono cieczą, tak aby rurka PEEK była mniejsza niż butelka z rozpuszczalnikiem, aby sprawdzić, czy ciecz kapie dowolnie.Jeśli ciecz nie kapie lub kapie powoli, oznacza to, że głowica filtra rozpuszczalnika jest zablokowana.Zabieg: Namoczyć w 30% kwasie azotowym na pół godziny i spłukać ultraczystą wodą.Jeśli ciecz kapie losowo, głowica filtra rozpuszczalnika jest normalna i jest sprawdzana;B.Otwórz zawór płuczący, aby faza ruchoma nie przeszła przez kolumnę i jeśli ciśnienie nie zostanie znacząco obniżone, biała głowica filtra zostanie zablokowana.Leczenie: Odfiltrowane zaskórniki usunięto i poddano sonifikacji 10% izopropanolem przez pół godziny.Zakładając, że ciśnienie spadnie poniżej 100PSI, przefiltrowana biała piana jest normalna i jest sprawdzana;C.Usuń koniec wyjściowy kolumny, jeśli ciśnienie nie spadnie, kolumna zostanie zablokowana.Leczenie: Jeśli jest to blokada solą buforową, przepłucz 95%, aż ciśnienie będzie normalne.Jeśli przeszkoda jest spowodowana przez materiał lepiej zakonserwowany, należy zastosować przepływ silniejszy niż obecna faza ruchoma, aby przyspieszyć do normalnego ciśnienia.Jeżeli zgodnie z powyższą metodą długotrwałe ciśnienie czyszczenia nie zmniejszy się, można uznać, że wlot i wylot kolumny są połączone z przyrządem, a kolumnę można oczyścić fazą ruchomą.W tym momencie, jeśli ciśnienie w kolumnie nadal nie zmniejsza się, można jedynie wymienić płytkę sitową wejściową do kolumny, ale gdy operacja nie będzie dobra, łatwo jest doprowadzić do zmniejszenia efektu kolumny, więc spróbuj użyć mniej.W przypadku trudnych problemów można rozważyć wymianę kolumny.

(2) Nieprawidłowe ustawienie natężenia przepływu: Prawidłowe natężenie przepływu można zresetować.

(3) Nieprawidłowy współczynnik przepływu: wskaźnik lepkości dla różnych proporcji przepływów jest inny, a odpowiadające mu ciśnienie w układzie przepływu o wyższej lepkości jest również większe.Jeśli to możliwe, można wymienić rozpuszczalniki o niższej lepkości lub ponownie je przygotować.

(4) Dryf zera ciśnienia w systemie: wyregulować zero czujnika poziomu cieczy.

2, ciśnienie jest zbyt niskie (1) jest zwykle spowodowane nieszczelnością układu.Co należy zrobić: Znajdź każde połączenie, zwłaszcza interfejs na obu końcach kolumny, i uszczelnij obszar wycieku.Usuń słupek i dokręć lub wyrównaj folię PTFE z odpowiednią siłą.

(2) Gaz wpływa do pompy, ale w tym czasie ciśnienie jest zwykle niestabilne, wysokie i niskie.A co gorsza, pompa nie będzie w stanie wchłonąć płynu.Metoda leczenia: otwórz zawór czyszczący i wyczyść przy natężeniu przepływu 3 ~ 5 ml/min.Jeżeli nie, zasysano pęcherzyki powietrza z zaworu wydechowego za pomocą dedykowanej rurki igłowej.

(3) Brak wypływu fazy ruchomej: sprawdzić, czy w butelce zbiorczej znajduje się faza ruchoma, czy zlew jest zanurzony w fazie ruchomej i czy pompa pracuje.

(4) Zawór odniesienia nie jest zamknięty: zawór odniesienia jest zamknięty po zwolnieniu.Zwykle spada do 0,1.~ 0,2 ml/min po zamknięciu zaworu referencyjnego.

Streszczenie:

W artykule przeanalizowano jedynie typowe problemy występujące w chromatografii cieczowej.Oczywiście w naszym praktycznym zastosowaniu napotkamy więcej innych problemów.W postępowaniu z usterkami powinniśmy kierować się następującymi zasadami: zmieniać tylko jeden czynnik na raz, aby określić związek pomiędzy hipotetycznym czynnikiem a problemem;Ogólnie rzecz biorąc, podczas wymiany części w celu rozwiązania problemu powinniśmy zwrócić uwagę na umieszczenie zdemontowanych, nienaruszonych części z powrotem na miejscu, aby zapobiec powstawaniu odpadów;Wyrobienie dobrego nawyku w zakresie nagrywania jest kluczem do skutecznej obsługi błędów.Podsumowując, stosując HPLC, należy zwrócić uwagę na wstępną obróbkę próbki oraz prawidłową obsługę i konserwację sprzętu.