Rekombinowane antygeny białkowe często mają kilka różnych epitopów, z których niektóre są epitopami sekwencyjnymi, a niektóre są epitopami strukturalnymi.Przeciwciała poliklonalne otrzymane przez immunizację zwierząt zdenaturowanymi antygenami są mieszaninami przeciwciał specyficznych dla poszczególnych epitopów i mogą być ogólnie stosowane do wykrywania struktur naturalnych lub zdenaturowanych białek docelowych.Uboczną korzyścią stosowania zdenaturowanych białek jako immunogenów jest to, że zdenaturowane białka są zwykle bardziej immunogenne i mogą stymulować silną odpowiedź immunologiczną u zwierząt.
System ekspresyjny Escherichia coli jest zwykle wybierany do celów antygenowych, ponieważ jest to system najbardziej kosztowny pod względem czasu i pieniędzy.Aby poprawić możliwość ekspresji docelowego białka i wygodę oczyszczania, czasami ulega ekspresji tylko mały fragment docelowego białka, taki jak specyficzna domena.
Trójwymiarowa struktura białek
Specyficzna domena białka
Jeśli celem przygotowania przeciwciał jest wyłącznie wykrywanie wb, ekonomiczne i szybkie jest użycie syntetycznego małego peptydu jako antygenu, ale istnieje ryzyko słabej immunogenności lub braku regeniczności z powodu niewłaściwego wyboru segmentu peptydowego.Ponieważ przygotowanie przeciwciał wymaga długiego czasu, często wybiera się dwa lub trzy różne segmenty peptydowe w celu przygotowania przeciwciał przy użyciu antygenu polipeptydowego, aby zapewnić wskaźnik powodzenia eksperymentu.
Czystość antygenu polipeptydowego do immunizacji musi być większa niż 80%.Chociaż teoretycznie przy wyższej czystości można uzyskać przeciwciała o lepszej swoistości, w praktyce zwierzęta zawsze wytwarzają dużą liczbę nieswoistych przeciwciał, maskując w ten sposób korzyści płynące z czystości antygenu.
Ponadto preparat przeciwciał z małych peptydów musi być usieciowany z odpowiednim antygenem nośnikowym, aby zwiększyć jego immunogenność.Dwoma powszechnymi nośnikami antygenów są KLH i BSA.
Czas publikacji: 23 marca 2023 r