Niektóre pytania i odpowiedzi na temat rozpuszczalności zmodyfikowanych peptydów

1. Jakie są zanieczyszczenia w tych, które nie oczyszczone przez HPLC?

Odp.: Zmodyfikowane zanieczyszczenia peptydowe i nie zmodyfikowane peptydowe w surowym i odsalonym zmodyfikowanym peptydie: takie jak zmodyfikowany peptyd o długości niefalowej i niektóre surowce, takie jak DTT, TFA itp.

2. Jakie zanieczyszczenia są oczyszczone przez HPLC?

Odp.: Zmodyfikowany peptyd oczyszczony przez HPLC nadal będzie miał wiele zanieczyszczeń, a zanieczyszczenia są zwykle krótkimi peptydami i małym TFA.

3. Jak długo jest odpowiedni?

Odp.: Synteza zmodyfikowanego peptydu musi wziąć pod uwagę długość zmodyfikowanego peptydu, ładunku, hydrofilowości i hydrofobowości i innych czynników. Im dłuższa długość, tym niższa czystość i wydajność surowego produktu, a tym wyższa trudność oczyszczania i prawdopodobieństwo trudności w syntezy. Jednak nie ma sposobu na zmianę sekwencji domeny funkcjonalnej zmodyfikowanego peptydu, ale w celu ukończenia syntezy zmodyfikowanego peptydu, czasami tylko pewne pomocnicze aminokwasy mogą być dodawane w górę i poniżej domeny funkcjonalnej w celu poprawy rozpuszczalności i hydrofobowości zmodyfikowanego peptydu. Jeśli zmodyfikowany peptyd jest zbyt krótki, mogą wystąpić problemy w syntezie. Pierwszym problemem jest to, że zsyntetyzowany zmodyfikowany peptyd ma pewne trudności w procesie po przetwarzaniu. Zmodyfikowany peptyd w 5 peptydach zwykle ma hydrofobowe aminokwasy, w przeciwnym razie przetwarzanie jest trudne. Zmodyfikowane peptydy poniżej 15 reszt aminokwasowych można ogólnie uzyskać z zadowalającą wydajnością i wydajnością.

Niektóre pytania i odpowiedzi na temat rozpuszczalności zmodyfikowanych peptydów

4. Jak ocenić rozpuszczalność zmodyfikowanego peptydu na podstawie sekwencji?

(1) Zmodyfikowany peptyd zawierający wysoki odsetek hydrofobowych aminokwasów, takich jak LEU, VAL, IIE, MET, PHE i TRP, nie jest łatwo rozpuszczalny w roztworze wodnym lub prawie nierozpuszczalny. Ten aminokwas może być problematyczny w oczyszczeniu lub syntezy.

(2) the proportion of hydrophobic amino acids under normal conditions < The proportion of charged amino acids can reach up to 20%. If the N or C of the modified peptide is short, the increase of polar amino acids can also improve the solubility.

5. Dlaczego trudno jest syntetyzować CYS, MET lub TRP?

Odp.: Zmodyfikowane peptydy zawierające Cys, MET lub TRP nie mogą być zsyntetyzowane, a produkty o wysokiej czystości są trudne do uzyskania. Wynika to głównie z faktu, że grupy te są mniej stabilne i podatne na utlenianie. Zastosowanie i przechowywanie tych zmodyfikowanych peptydów wymaga szczególnej ostrożności, aby zapobiec powtarzającemu otwarciu pokrywki.

6, dlaczego pewna syntetyczna wydajność lub czystość będą bardzo niskie?

Odp.: Istnieje znaczna różnica między syntezą zmodyfikowanych peptydów a syntezą starterów. Istnieje bardzo niewiele starterów, których nie można zsyntetyzować, ale często istnieją zmodyfikowane peptydy, których nie można zsyntetyzować. Takich jak Val, Ile, Tyr i TRP, LEU, PHE, GLN i AMINO AMINO BLIZKI lub Pętli, zmodyfikowane peptydy nie mogą rozciągać się w procesie syntezy, wydajność syntetyczna jest niższa. Wydajność syntezy i czystość produktu są bardzo niskie w następujących przypadkach, takich jak: powtórzenie pro, ser-ser, powtórzenie ASP, cztery kolejne gly itp.

7. Jak to jest oczyszczone?

Odp.: Zmodyfikowane peptydy są ogólnie oczyszczane przez kolumnę z odwróconą fazą (taką jak C8, C18 itp.) Przy 214 nm. Układ buforowy jest na ogół rozwiązaniem zawierającym TFA, PH2,0. Buffera zawierała 0,1%TfainddH2O, a buffer zawierał 1%TFA/ACN/PH2,0. Został rozpuszczony w Buffera przed oczyszczeniem; Jeśli roztwór nie jest zadowalający, rozpuść się z bufwerką, to rozcieńcz Buffera; W przypadku wysoce hydrofobowych zmodyfikowanych peptydów czasami dodaje się trochę masy masy kwasowej lub kwasu octowego.