W badaniach biologicznych zwykle stosuje się polipeptydy o długiej sekwencji.W przypadku peptydów mających sekwencję większą niż 60 aminokwasów, do ich otrzymania na ogół stosuje się ekspresję genów i SDS-PAGE.Metoda ta jest jednak czasochłonna i końcowy efekt separacji produktu nie jest dobry.
Wyzwania i rozwiązania dla syntezy długich peptydów
Przy syntezie długich peptydów zawsze spotykamy się z problemem, to znaczy, że wraz ze wzrostem kolejności syntezy zwiększa się zawada przestrzenna reakcji kondensacji i należy tak dobrać czas reakcji, aby reakcja została zakończona.Jednakże im dłuższy czas reakcji, tym więcej skutków ubocznych powstaje i powstaje część docelowego peptydu.Takie pozostałości – brakujące łańcuchy peptydowe są kluczowymi zanieczyszczeniami powstającymi w syntezie długich peptydów.Dlatego w syntezie długich peptydów kluczowym problemem, który musimy pokonać, jest zbadanie wysokiej jakości warunków reakcji i metod reakcji, tak aby reakcja kondensacji aminokwasów była bardziej wszechstronna i pełna.Ponadto skróć czas reakcji, ponieważ im dłuższy czas reakcji, tym bardziej niekontrolowane reakcje uboczne, tym bardziej złożone produkty uboczne.Dlatego podsumowano następujące trzy punkty:
Syntezę mikrofalową można zastosować: W przypadku niektórych aminokwasów napotykanych w procesie syntezy, które nie są łatwe do zintegrowania, można zastosować syntezę mikrofalową.Metoda ta daje niezwykłe rezultaty i znacznie skraca czas reakcji oraz ogranicza powstawanie dwóch kluczowych produktów ubocznych.
Można zastosować metodę syntezy fragmentów: Gdy niektóre peptydy są trudne do zsyntetyzowania za pomocą powszechnych metod syntezy i niełatwe do oczyszczenia, możemy zastosować całą kondensację kilku aminokwasów w pewnym segmencie peptydu do łańcucha peptydowego jako całości.Metoda ta może również rozwiązać wiele problemów w syntezie.
Można zastosować syntezę acylohydrazydu: acylohydrazydowa synteza peptydów to metoda syntezy w fazie stałej N-końcowego peptydu Cys i C-końcowego polipeptydu hydrazydowego, chemiczna selektywna reakcja pomiędzy utworzeniem wiązań amidowych w celu uzyskania metody wiązania peptydowego.W oparciu o pozycję Cys w łańcuchu peptydowym metoda ta dzieli cały łańcuch peptydowy na wiele sekwencji i odpowiednio je syntetyzuje.Na koniec docelowy peptyd otrzymuje się w reakcji kondensacji w fazie ciekłej.Metoda ta nie tylko znacznie skraca czas syntezy długiego peptydu, ale także znacząco zwiększa czystość produktu końcowego.
Długie oczyszczanie peptydów
Specyfika długich peptydów nieuchronnie prowadzi do złożonych składników surowych peptydów.Dlatego też oczyszczanie długich peptydów metodą HPLC stanowi również wyzwanie.seria amyloidowa procesu oczyszczania polipeptydów, pochłaniająca wiele doświadczeń i z powodzeniem stosowana w oczyszczaniu długich peptydów.Dzięki przyjęciu nowego sprzętu, mieszaniu wielu systemów oczyszczania, wielokrotnemu rozdzielaniu i innym doświadczonym metodom znacznie poprawił się wskaźnik powodzenia oczyszczania długich peptydów.
Czas publikacji: 18 kwietnia 2023 r